BioVeris™ Hybridoma Cloning Factor (HCF)

• Hybridoma Cloning Factor
• Q&A集

細胞融合とハイブリドｰマのクロｰニングにFeeder Cell Lyerや調合培地よりも効果があり､使用法も簡単です｡特に培養の難しいハイブリドｰマに適しています｡

• HAT選択培地による培養中､生存するバイブリドーマの数が増加します｡
• 抗体を産出する細胞の数が増加します｡
• 細胞がストレスを受けた場合でも細胞の生存率は変わりません｡
• Feeder Cell Lyerを用意する必要はありません｡
• 低細胞密度でもハイブリドｰマがクロｰニングできます｡
• ウイルスフリｰのマクロファージ細胞株由来です｡
• Hyridoma Cloning Factorは、Growth Mediumまたは選択培養液に1:10の割合で混合してご使用ください。
• Feeder Cell Layerによるコンタミは取り除いてあります。
• 低レベルエンドトキシン：Feeder Cell Layerや他の調製培地にはエンドトキシンが高レベルで含まれている場合があります。
• マウス抗体によるコンタミはありません。高バックグラウンドの原因となるMurine Feeder cellによるマウス抗体を取り除いてあります｡
• 生産性を向上させます。プランニングやFeeder Layerの調製時間をなくします。
• No Refeeding
• コストの削減。コロニーを大量に用意する必要はありません。
• Cell Lineテスト済み。製品製造に使用されたMurin Cell LineはMicoplasmaおよびMurine Adventitious Virus (MAPテスト)においてマイナスです。

Hybridoma Growth After Fusion

BALB/cマウスの脾細胞とSP2/0ミエローマを3：1比で新たに融合したマウスB-Cellハイブリドーマを用いました。1ウェルあたり8×104の脾細胞をプレーティングし、10日間培養後の一枚あたりのコロニー数の平均値（5枚以上の平均）と、抗体を産出したコロニーの割合を表しています。増殖培地のみ、腹腔細胞調整培地（PCCM)およびBV™HCFとの比較です。BV™HCFを含んだプレートにおけるコロニー発現数の平均値は、増殖培地のみのものと比べほぼ2倍になりました。また、抗原特異的な抗体の産出率は15倍に増加しました。

Hybridoma Cloning

BV™HCFを用いて増殖させたIL-6依存性B-cellハイブリドーマとフィード細胞層を用いたものとのクローニング効率の比較を行いました。マウスのハイブリドーマ株を１ウェルごとに増殖培地のみ、BV™HCF、フィード細胞層を加えた96穴プレートに殖し、10日間の増殖培養後、目視にてコロニー数を確認しました。 一枚あたりの平均コロニー数（平均5枚分）はBV™HCFで増殖させた場合、増殖培地やフィーダー細胞層に比べ5倍以上となりました。

Growth of Cells After Thawing

BV™凍結保存したものからの生細胞の回収は、初期生細胞数に比例します（生細胞数/総細胞数）。理論的には、解凍後の生存率は90％以上あるべきです。しかしながら、常に期待できるわけではありません。凍結保存状態のハイブリドーマ株の回収率を高めるためには、解凍後のハイブリドーマの成長を直接促進させるBV™HCFを5−10％培地に加えることをお勧めします。

解凍後のSP2/0細胞で異なるバッチごとの生存率を、トリパンブルーを用いた色素排除試験にて同定しました。 それぞれのバッチごとに5％BV™HCF含有培地と非含有培地とに分け、1日培養後2種類の培地における生細胞数および生存率を確認しました。上記のグラフが示す通りBV™HCFは、解凍直後90％未満の生存率だったSP2/0細胞の数を遥かに改善しました。

Production of Hamster-Mouse Heterohybridomas

BV HCF can enhance the number of hamster-mouse heterohybridomas obtained after HAT selection and cloning as shown in this table.

* Armenian hamsters were immunized with antigen by standard methods and sacrificed three days after the last injection. Then splenocytes and the murine myeloma cells P3X63-Ag.8.653 were fused with PEG4000. The cells were plated into 96-well tissue culture plates with and without 10% HCF (5).

** Hybridomas of interest were cloned by limiting dilution at a density of 0.6 cells/well with and without 10% Hybridoma Cloning Factor.

BV HCF enhanced the number of heterohybridomas obtained during HAT selection by 2.6-fold. It also improved the cloning efficiency of the heterohybridomas by approximately 1.5 to 3.0-fold

Product Composition

The basal composition of HCF is Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM), 2% Fetal Bovine Serum (FBS; heat-inactivated; collected from USDA inspected abattoirs within the United States; BVD, PI3, and IBR negative), and kanamycin sulfate.

Product Quality Control

Quality Control of HCF includes

• Sterile filtration through a capsule filter with a pore size of 0.2 um.
• Sterility testing according to USP XXIII guidelines (sampling by filtration checking for bacterial growth in Fluid thioglycollate medium, Trypticase soy broth and Sabouraud's broth)
• Mycoplasma detection in growth agar and broth
• Endotoxin quantitation as determined by the Limulus Amebocyte Lysate Gel Clot Assay; <10ng/ml
• Biological activity determined by cloning and fusion efficiency assays

Stability and Storage

BV™ Hybridoma Cloning Factor is stable at -20℃ for at least two years from date of manufacture. HCF may be frozen and thawed at least five times without appreciable loss of activity, however it is recommended that the product be aliquoted into single use volumes so that freeze-thaw cycles will not be required. HCF is stable after 3 days at 4℃, room temperature (22℃), or 37℃.

製品のご購入・ご相談はTEL:03-3545-5720、またはお問い合わせまで。