Direct Lysis Fosmid96 DNA Purification Kit

アプリケーション

• 細胞を迅速かつ直接的に溶解してプラスミドDNAを調整し、96ウェルフォーマットシークエンシングに

Direct Lysis Fosmid96 DNA Purification Kitは200μLの終液培養液を直接溶解してフォスミドDNAを抽出するキットです。培養液の遠心分離や細胞ペレットの再懸濁をおこなう必要はありません（Fig.1）。このキットは、96ウェルフォーマットでおこなうシークエンシング用のテンプレートをフォスミドクローンから迅速に調整できるようデザインされています（Fig.2および3）。特許を取得したRNase Blendを取り入れた改良型アルカリ溶解法が採用されており、RNAを効率的に除去できます。また、付属の自己誘導溶液をCopyControl™フォスミドの自己誘導終液培養液200μLから、6〜8回のエンドシークエンシング反応をおこなうのに必要な量のDNAを回収できます。

このキットにはハイスループットDNA抽出に必要なすべての試薬およびプラスチック用品が付属しており、ロボットによる自動処理にも適しています。

利点

• 集菌や細胞ペレットの再懸濁の必要がありません
• 200μLの培養液に植菌するため、2mLのディープウェル培養プレートを用意する必要ありません
• 使用する培地の量は、標準的な1.2mLスケールの調整に要する115mLと比較して、プレートあたり20mL未満と少なくなっています
• 最終的なDNAは少量の懸濁液中に回収されます（50μL）
• プロトコールはわずか25分で完了します
• 自己誘導されたCopyControl™フォスミド（40kb）からは6〜8回のエンドシークエンシング反応を実施でき、平均して700〜900塩基の読み取りが可能です（Fig.3）
• 小型のフィルター付きプレートブロック（H15×L127×W85 mm）

Fig.2　 Direct Lysis Fosmid96 DNA Purification Kitで抽出したフォスミドDNAの制限分析

フォスミドライブラリーからランダムに選択したクローンをNot Iで消化し、得られたDNAをアガロースゲル電気泳動で分析しました。

Lane M : キロベースマーカー
Lane 1 : 40kbのコントロールインサート
Lane 2〜19 : Not I消化したフォスミドDNA

Fig.3　シークエンス解析によるフォスミドDNAの品質の確認

自己誘導されたCopyControl™フォスミドから抽出されたDNA4μLとpCC1FOS Reverse Sequencingプライマー用いてシークエンシングを実施し、UWBC DNA Sequencing Synthesis Facility（ウィスコンシン州マディソン）のABI 3730 Analyzerで分析しました。

Contents: Culture plates, 96-well fritted filter plates, collection plates, plate sealers, gas-permeable sealers, reagents for five 96-well preps.

プロトコール

Direct Lysis Fosmid96 Purification Kit

• BACMAX96™ DNA Purification Kit
• CopyControl™ BAC Cloning Kits (BamH I, EcoR I, Hind III)
• CopyControl™ Fosmid Library Production Kit
• CopyControl™ HTP Fosmid Library Production Kit
• Fast-Link™ DNA Ligation and Screening Kit
• FosmidMAX™ DNA Purification Kit
• Plasmid-Safe™ ATP-Dependent DNase
• TAQXpedite™ PCR System (FAST End-Point)

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