ExactSTART™ Eukaryotic mRNA 5´- & 3´-RACE Kit

Applications

• mRNAの代替の転写サイトとポリアデニル化サイトの発見
• mRNAの5’及び3’の正確なマップ
• スプライス変異型及び転写ホモログの同定や特徴付け
• RACEもしくは他のRNA転写産物発見方法のための真核生物からの二本鎖cDNAの作製

一般的なRACE用テンプレート調整は、RNAの逆転写反応において作製されるcDNAの3’末端にテンプレートにコードされていないdNTPsの付加に依存しています。デオキシヌクレオチドの付加は転写産物の5’末端を同定するのを困難にしています。 さらに、dNTPsはあるcDNAには効率的に付加されますので、RACEで増幅されたcDNAの最終的な集団からの転写産物のロスにつながります。

対照的に、ExactSTART Eukaryotic mRNA 5´ & 3´-RACE Kitは、 mRNAの正確な5’末端のヌクレオチドにタグをするためにRNA修飾酵素のセットを採用しています。5´タグ配列にはPCR用のプライマーサイトが含まれています。RNAの3’末端は、5’末端にPCR用のプライマーサイトを含んでいるoligo(dT)プライマーを使用して逆転写反応でタグ付けされます。5´及び3´末端がタグ付けされたcDNAは、そのまま使用されるか、5’&3’ RACEや次世代シーケンスのような他のアプリケーションの使用のために二本鎖cDNAへ変換もしくはPCRによって増幅することができます。

ExactSTART™ Eukaryotic mRNA 5´ & 3´ RACE Kitは、下記のような3’末端がポリアデニル化したRNA（e.g. 真核生物mRNA）から5’及び3’末端がタグ付けされたｃＤＮＡもしくは増幅された二本鎖cDNA (ds cDNA) を作製することができます。

5´-キャップ構造 / 3´-ポリアデニル末端　5´ m⁷GpppN-------[A]n 3´

5´-モノリン酸末端 / 3´-ポリアデニル末端　5´ pN----------------[A]n 3´

5´-トリリン酸末端 / 3´-ポリアデニル末端　5´ pppN-------------[A]n 3´

Benefits

• 正確 - Tag the exact 5´-nucleotide of mRNAs to unambiguously map the true transcription site of an mRNA. Unlike other 5´-RACE template production methods, the ExactSTART approach does not add template-independent nucleotides during the tagging process.
• 迅速 - 1日でRACE用テンプレートを作製
• 簡便 - シンプルなプロトコールによりゲル電気泳動による精製ステップ不要
• フレキシブル - RACEなどに使用するためのcDNA、ds cDNA もしくは増幅したds cDNA

Contents:

Tobacco Acid Pyrophosphatase and Buffer, ScriptGuard™ RNase Inhibitor, T4 RNA Ligase and Buffer, 5´-RACE Acceptor Oligo, ATP, MMLV Reverse Transcriptase and Buffer, cDNA Synthesis Primer, dNTP PreMix, RNase Solution, FailSafe™ PCR PreMix E, PCR Primer 1, PCR Primer 2, Nuclease-Free Water, RNA Control

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