EZ-Tn5™ <KAN-2>Tnp and EZ-Tn5™ <DHFR-1>Tnp Transposome™ Kits

EZ-Tn5™ Transposome™ 複合体はEZ-Tn5™ TransposonとEZ-Tn5™ Transposaseから成り、in vivoにおいてランダム遺伝子ノックアウトライブラリーを作製するシンプルで信頼性のある方法です。生細胞にEZ-Tn5 Transposomeをエレクトロポレーションし、EZ-Tn5 Transposonにエンコードされているマーカーで選択します。cell conjugation、suicide vectorsや特異的なホストの因子は必要なく、EZ-Tn5 Transposomesは、遺伝子システムが解明されていなく適切な分子ツールを持たない種に対して理想的なツールです。

Ready-to-useのEZ-Tn5 Transposomeはカナマイシンマーカー(＜KAN-2＞)とトリメトプリンで選択可能なdihydrofolate reductase gene(＜DHFR-1＞)があります。これらのマーカーは多くのグラム陰性のバクテリアにおいて既に発現されています 。もしくは、オリジナルのEZ-Tn5 TransposomeをEZ-Tn5™ pMOD™ Transposon Construction Vectorsで作製することもできます。

EZ-Tn5 Transposonは、両末端に双方向のシーケンスのための独自のプライマー結合部位があります。そのためノックアウトしたバクテリアゲノムは、シーケンスのテンプレートとしてキットに付属するプライマーともに使用することでシーケンスが行えます。EZ-Tn5™ ＜R6Kγori/KAN-2＞Tnp Transposome™ Kit やHyperMu™＜R6Kγori/KAN -1＞Tnp Transposome™ Kitを使用するとtransposonをrescueし、transposon付近をシーケンスできるtransposon insertionを作製することができます。

EZ-Tn5 Transposome-mediated insertionは多くの微生物にておこなわれています（Acinetobactor, Campylobacter, Escherichia, Mycobacterium, Proteus, Pseudomonas, Saccharomyces, Salmonella, Trypanosoma, Xylella, and others ）。transposition cloneの数は、ホスト細胞のtransformation efficiencyに大きく依存します。(Table 1)

type I restriction and modification systemが存在する場合にはtransposition efficienciesが低くなる可能性があります。その場合にはrestriction and modification systemをブロックするTypeOne™ Restriction Inhibitorが利用できます。

Figure 1. The EZ-Tn5™ Transposon insertion site in bacterial DNA can be sequenced directly using genomic DNA isolated using the MasterPure™ DNA Purification Kit and primers homologous to the ends of the transposon.

Table 1. Number of KanR transposon insertion clones produced from electroporation of 1 μl of EZ-Tn5™ ＜KAN＞Tnp Transposome™.

Based on user suggestions, we will gradually replace the "EZ::TN™" name by "EZ-Tn5™" so it will be easier to distinguish our hyperactive Tn5-based transposon products from our "HyperMu" transposon products.

Each kit contains a ready-to-use Transposome™ complex with either a kanamycin resistance marker or dihydrofolate reductase gene (for selection with trimethoprim) and forward and reverse primers for sequencing.

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