mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit with Poly(A)-Tailing
アプリケーション
- rRNAのコンタミがほとんどない原核mRNAを抽出しポリアデニル化して、RNA増幅および遺伝子発現解析に
- 原核cDNAライブラリーの作製に
mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit with Poly(A)-Tailingなら後続の操作や実験に向けて簡単かつ効率的に、a)リボソームRNA(rRNA)をほとんど含まない原核mRNAを１時間で抽出し、b)抽出された原核mRNAの3’末端をポリアデニル化できます。mRNA−ONLY Kitには、5'一リン酸をもつRNAを消化する改良型5’→3’エキソヌクレアーゼであるEPICENTRE社製のTerminator™ 5'-Phosphataste-Dependent Exonucleaseが付属します。細菌rRNAを基質としますので、ｍRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit with Poly(A)-Tailingを使用すれば、16Sおよび23S rRNAをほとんど含まない原核mRNAを抽出可能です。
mRNA-ONLY KitにはEPICENTRE社製のPoly(A) Polymeraseが付属しています。この酵素はATPを基質として使用してRNA分子の3'-ヒドロキシル末端にアデノシン一リン酸をテンプレート非依存的に付加します。Total RNA混合物からrRNAを除去することにより、ポリアデニル化反応の効率が大きく向上します（図1）。このキットを用いて調整したポリアデニル化mRNAは、cDNA合成や遺伝子発現解析などといったダウンストリームのアプリケーションに使用できます。
利点
- ポリアデニル化試薬が付属しており、別途購入する必要がありません
- このキットは、共生的・寄生的・病原性な相互関係（例：窒素固定、原核生物感染、バイオフィルムなど）を伴う生体試料など、原核生物同士の混合集団や原核細胞と真核細胞の混合集団から同時にmRNAを抽出することができます。
図１ トレーサー転写産物でスパイクした細菌total RNAのTerminator ExonucleaseおよびPoly(A) Polymerase処理
大腸菌total RNA（レーン1) と718塩基の転写産物を合わせてTerminator Exonucleaseによって処理し、rRNAを除去しました。（レーン3）。rRNAフリーのサンプルをPoly(A) Polymeraseで処理し、mRNAをポリアデニル化（レーン4)。total RNAとトレーサーの未処理の混合物（レーン5）もPoly(A) Polymeraseで処理しました（レーン6）。トレーサーがrRNA非存在下でより効率的に付加されたことが分かります
レーン2：分子量マーカー
| 商品名 | Cat.No. | 容量 |
| mRNA-ONLY™ Prokaryotic mRNA Isolation Kit with Poly(A)-Tailing | MOT60510 | 10 Reactions |
| Contents:Terminator™ 5´-Phosphate-Dependent Exonuclease, mRNA-ONLY™ Prokaryotic 10X Reaction Buffers A and B, RiboGuard™ RNase Inhibitor, mRNA-ONLY™ Stop Solution, 5M LiCl Solution, Poly(A) Polymerase, 10X Poly(A) Polymerase Reaction Buffer, ATP, RNase-Free Water. | ||
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