T4 RNA Ligase 2, Deletion Mutant

アプリケーション

• RNA-Seqのようなsmall-RNAトランスクリプトーム解析のためのcDNAライブラリーの調製
• miRNAクローニングのための最適なlinker ligation

T4 RNA Ligase 2, Deletion Mutantは、T4Rnl2(1-249)としても知られ、クローニングや次世代RNAシーケンスのために1本鎖のアデニル化DNAもしくはRNAヌクレオチドをsmall RNAへの結合するために使用されます。アデニル化されたDNAもしくはRNAの5´末端がRNAの3'末端へ結合されます。完全長の酵素, T4Rnl2(1-249)とは異なり、ATPの存在下で基質の5'末端をアデニル化することはできません。しかしながら、予め活性化されたドナー(App-DNAもしくはApp-RNA)を使用することができ、アクセプターの3'末端へ結合します。ATP非存在下でのライゲーション反応は環状化や他の望ましくない2分子間反応を防ぐことができます。

ユニットの定義

標準的な条件下で37℃、30分間に39-merの相補鎖DNAにアニールするときに、22-mer RNAがアデニル化した17-mer DNAへ50%結合するのに必要な酵素量を1ユニットとする。

保存バッファー

50% glycerol containing 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol (DTT), and 0.1% Triton® X-100.

T4 RNA Ligase 2, Deletion Mutant, 10X 反応バッファー

500 mM Tris-HCl (pH 7.5), 20 mM MgCl₂, and 10 mM DTT.

品質管理

T4 RNA Ligase 2, Deletion Mutantは検出可能なDNAエキソヌクレアーゼ活性、DNAエンドヌクレアーゼ活性およびRNase活性がないことを確認しています。

プロトコール

T4 RNA Ligase 2, Deletion Mutant

• ScriptMiner™ Small RNA-Seq Library Preparation Kit
  (MultiPlex; Illumina®-compatible)

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