WaterMaster™ DNA Purification Kit

アプリケーション

DNAを試料水から精製して、PCR、クローニング、シークエンシング、DNA マイクロアレイ解析に

WaterMaster™ DNA Purification Kitにはご使用のフィルタを通過後の試料水から微生物DNAを精製するために必要なすべての試薬が付属しています。細菌および真核生物からのDNAを精製できます。精製DNAは制限酵素処理、PCR、サブクローニング、マイクロアレイ解析に使用できます。このキットには簡単で穏やかな手法が採用されており、有毒な有機溶剤や機械的な細胞破砕を使用する必要はありません。最終的な精製DNAは他社のキットと比較して1/50の容積で得られるため、DNAの濃縮工程を必要としません。 試料水中のバクテリアの検出限界試験として、試料水100mLあたり105〜101個の大腸菌を0.45μmのフィルターで濾過後にWaterMaster Kitを用いてDNAを抽出し、PCRにより検出しました（Fig.1）。Fig.1から、試料水100mLあたりわずか10個のバクテリアに由来するDNAでも、WaterMaster Kitにより抽出し、真正細菌rRNA遺伝子に特異的なプライマーを用いたPCR増幅により検出できることがわかります。

利点

• 簡単で穏やかな手順です
• 高分子量DNAを精製できます（図2）
• 有毒な有機溶剤を使用する必要がありません
• DNAは少量の溶液中に回収されます

Fig.1　PCRによる試料水中の大腸菌の検出

蒸留水100mLに様々な料のE.coli K12を懸濁し、0.45μmのフィルターで濾過後にWaterMaster Kitを用いてDNAを抽出しました。抽出したDNAのありコートをPCRのテンプレートとして使用し、真正細菌rRNA遺伝子に対応するプライマーとFailSafe PCR Systemを用いて増幅しました。PCR産物をアガロースゲル電気泳動により分析しました。
Lane M : 100bpマーカー、Lane1〜4は以下の量の大腸菌細胞懸濁液から精製されたDNAから増幅されたPCR産物
Lane 1 : 10⁵個、Lane 2 : 10³個、Lane 3 : 10²個、Lane 4 : 10¹個、Lane 5 :negative control
アンプリコンサイズは350bpです

Fig.2　

WaterMaster™ DNA Purification Kit を用いてspring-fed pond の水サンプルのマイクロプローブから高分子量DNAを精製しました。
SYBR® Gold を用いて1% アガロースゲルを染色しました。
Lane M: kb DNA ladder、lane 1: WaterMaster Kit で精製された5-ng DNA

• プロトコール

• FailSafe PCR System
• TAQXpedite PCR System (FAST End-Point)
• Meta-G-Nome™ DNA Isolation Kit